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      牛血清白蛋白(BSA)的應用
    1. 發布日期:2023-07-27      瀏覽次數:53
      • 牛血清白蛋白(BSA)是牛血清中的一種球蛋白,包含607個氨基酸殘基,分子量為66.446KDa,等電點為4.7。

        應用:
        牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有廣泛的應用,例如在WB實驗中加入BSA,通過提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。
        防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性減輕不利環境因素,如加熱、表面張力及化學因素引起的變性。

        測定蛋白濃度
        按50:1配置BCA工作液。
        10ulC液(蛋白標準)+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。
        再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。
        分別加PBS定容至20ul。
        各孔中加入200ulBCA工作液,室溫放置2小時。
        用酶標儀測定蛋白濃度:測定A562,依標準曲線算出蛋白濃度。

        SDS-PAGE電泳
        1、制膠:按比例配制分離膠,緩緩地搖動溶液,使激活劑混合均勻,將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃極中,再在液面上小心注入一層水,以阻止氧氣進入凝膠溶液中,靜置40min。
        同前按比例配制濃縮膠,但混勻溶液時不要過于劇烈以免引入過多地氧氣。
        吸去不連續系統中下層分離膠上的水分,連續平穩的注入凝膠溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡,靜制60min以上以保證聚合。
        2、預電泳:將聚合好的凝膠安置于電泳槽中,小心拔去梳子,加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預電泳20-30min。
        (目的是清除凝膠內的雜質, 疏通凝膠孔徑以保證電泳過程中電泳的暢通)。
        3、樣品準備:首先計算上樣體積,然后按樣品上樣buffer=4:1的比例加入上樣bufer混勻,沸水10分鐘,冰上5分鐘。
        4、加樣:預電泳后依次加入標準品(Marker)和待分析樣品。
        (加樣時間要盡量短,以免樣品擴散,可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應。每個泳道加5ul 。)
        5、電泳:加樣完畢,選擇80V恒壓進行電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿到達兩膠交界處(一般約20分鐘),更換至100V恒壓電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿下至凝膠末端處,即停止電泳(一般約為1小時20分鐘)。

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